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将这些校准后的值,包括0.100μg/mL浓度的平均值在双周半对数坐标图纸上,以抑菌圈直径为横坐标(算术级),以μg/mL计的浓度为纵坐标(对数级),通过这些点以式(1)、(2)绘出最佳直线。
L＝(3a＋2b＋c－e)/5 …………………………(1)
H＝(3e＋2d＋c－a)/5 …………………………(2)
式中：L——标准曲线的最低浓度的抑菌圈直径 (四环素,土霉素为0.050μg/mL,金霉素为0.010μg/mL)；
H——标准曲线的最高浓度的抑菌圈直径 (四环素,土霉素为0.800μg/mL,金霉素为0.400μg/mL)；
c——参考浓度0.100μg/mL的45个抑菌圈直径的平均值；
a、b、d、e——标准曲线中其他标准浓度的抑菌圈直径经校准后的平均值。
6.2 样品中四环素族抗生素残留量的检定
6.2.1 四环素残留量的检定：每份样品取3个检定用平板,在每个检定用平板上 3个间隔的小管内加满四环素标准参考浓度溶液,另外3个小管内加满被检样液,将陶瓷盖重新盖好,30±1℃培养17±1h,然后翻转平板,除去小管,精确地测量产生的抑菌圈直径(精确到0.1 mm),分别求出3个检定用平板上参考浓度和被检样液的抑菌圈直径数值的平均值,经校正点校准后的值从四环素标准曲线上查出被检样液中的四环素的含量。
6.2.2 土霉素残留量的检定：除在每个检定用平板上3个间隔的小管内加满土霉素标准参考浓度溶液及经校正点校准后的值从土霉素标准曲线上查出被检样液中土霉素的含量外,其他步骤与四环素残留量的检定相同。
6.2.3 金霉素残留量的检定：除在每个检定用平板上3个间隔的小管内加满金霉素标准参考浓度溶液及经校正点校准后的值从金霉素标准曲线上查出被检样液中金霉素的含量外,其他步骤与四环素残留量的检定相同。
7 样品中四环素族抗生素残留量的计算和报告
从标准曲线上查出符合该被检样液经校准后的抑菌圈直径数值的含量,乘以稀释倍数3,得出结果以μg/g报告。
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